黄曲霉克星国达黄曲霉免疫亲和专用小柱

国达黄曲霉免疫亲和专用小柱价格：0.00元/ 发货期限：自买家付款之日起3天内发货 有效期至：长期有效

食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1 和M2的检测

1、方法简介：

本方法是用免疫亲和柱净化，高效液相色谱荧光法检测黄曲霉毒素 B1，B2，G1 , G2，M1和  M2，此法可适用于果仁及其类似物，干水果，谷物，调味品，茶叶，咖啡，可可，及其他食品原料和饲料。黄曲霉毒素易溶于极性的有机试剂，因此均匀基质中的黄曲霉利用甲醇/水通过摇晃或分散提取而得，对于高脂肪/油含量的样品基质需加入正己烷予以脱脂。然后过滤 PBS稀释。但对于饲料，调味品，茶叶，咖啡，可可等不用   PBS而用吐温溶液稀释然后经玻璃纤维滤纸过滤，然后经 HPLC柱后光化学衍生荧光检测器检测。

2、提取步骤 仪器，所需试剂，溶剂

黄曲霉毒素免疫亲和柱系列：免疫亲和柱系列  (1ml，25支/盒；3ml，15支/盒)；高效液相装置：安捷伦  1200 系列 含泵，在线脱气机，自动进样器，荧光检测器，柱温箱；光化学反应器：   Photochemical    Reactor 另带反应圈和 UV灯；色谱柱： XB-C18    5µm, 250 x 4.6 mm；预柱： C18 4 x 2 mm；均质机；水平振荡器；搅碎机；滤纸；漏斗；锥形瓶：100 ml；玻璃纤维过滤器；SPE转接头及  50ml大容量上样器   SPE Adapter10 ml一次性注射器；分析天平（精度 0.02 g)；1.8 mL自动进样样品瓶；移液枪；SPE装置带抽真空系统：SPE  Device

黄曲霉毒素  B1, B2, G1, G2,M1,M2混标或需测单标；吐温  20；PBS 缓冲溶液：1.16 g  Na2HPO4/0.20 g  KH2PO4/ 8  g NaCl/0.2  g KCl  溶于900ml水中，用  HCL或  NaOH调  PH至  7.4然后定容至   1000ml；磷酸氢二钠；磷酸二氢钾；氯化钾；氯化钠；去离子水；甲醇，分析纯；甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯；正己烷，分析纯；提取溶液：甲醇和水体积比  80/20，对于泥浆样纯甲醇（分析纯）作为提取溶剂单独使用；HPLC洗脱液  A：水。洗脱液  B：甲醇/乙腈    80/20 (v/v)。吐温溶液 ：100ml吐温  20 溶于 900ml水中HPLC校正标准溶液：由标准溶液配成目标物含量为 1ug/kg的校正溶液前处理步骤 花生果仁类似产品的提取（开心果，杏仁，杏仁壳，花生及其类似物）：称取 50g浆状样（均质时加入  100-300%水）加入 5gNaCl（对于加标样品加入加标溶液），加入 75ml纯甲醇然后均质  3分钟或震荡提取  30分钟。对于量少的样品，称 25g干燥的均匀样，加入  5g NaCl和  100ml甲醇/水   80/20 (v/v)  溶液然后均质 3分钟或震荡  30分钟进行提取。将提取液用滤纸过滤或离心，上清液转移于 100ml锥形瓶中。对于特殊的花生酱或其他果仁酱，其外面有一层油脂，所以很难被提取。称25g样品，加入  5g NaCl，100ml提取溶液和  50ml正己烷。用均质机提取  3-5分钟，油脂部分会溶于正己烷相，过滤收集澄清液。 谷物牛奶类称取 25g样于  250ml锥形瓶中，加入  5g NaCl，100ml提取溶液（对于加标样品加入加标溶液），然后在水平震荡器上 150  rpm震荡  30分钟。对于奶粉样品可称取 2-5g加提取液溶解，如难溶解可适当加热，滤纸过滤，收集澄清液。调味品，茶，咖啡，可可，饲料，医药品，辣椒提取物称取 20g干样，50g泥浆样，加入   5g NaCl，100ml提取溶液，浆状样加   80ml      纯甲醇（对于加标样品加入加标溶液），然后在水平震荡器上 150  rpm 震荡  30分钟。滤纸过滤，收集澄清液。取 5ml滤液加入  20ml吐温溶液稀释，稀释液用玻璃纤维过滤器过滤。空白值 试剂空白值必须测定。免疫亲和柱（IAC）净化将免疫亲和柱置于固相萃取装置上，一个样品对应一根柱子；10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在  2 – 3 ml/min，确保上样前柱子保留少量（0.5ml）的 PBS溶液，活化液不收集；1、花生，果仁类似物及谷物牛奶的提取液：3.1ml提取液用  9.9mlPBS稀释。用 12.6ml稀释液通过  IAC，但流速不能超过 5 mL/min。用约 20ml去离子水淋洗柱子，其中 10ml流速不得超过  5 mL/min，抽真空 1分钟；2、调味品，茶，咖啡，可可，饲料，医药品，辣椒提取物：9ml  稀释样品通过免疫亲和柱，流速不超过 5 mL/min。用约 20ml去离子水淋洗柱子，其中   10ml流速不得超过 5 mL/min，抽真空 1分钟；用 1.5ml甲醇洗脱；（将柱子接于玻璃装置上，用 0.75ml  甲醇两次将目标物洗脱下来并收集于15ml 离心管中，起始在柱子上加压令其大概通过 4  滴液滴，然后利用重力让其自然流下，最后通入空气令液体全部流出并收集。）洗脱液用 1.5ml水稀释并混匀,最终体积为  3 ml；过滤后上机测试

注：具体免疫亲和柱使用方法可参考说明书

3.       液相色谱-荧光测定

仪器液相色谱系统： Agilent 1200二元高压泵     Agilent 1200真空脱气机    Agilent 1200  恒温自动进样器     Agilent 1200  柱温箱光化学柱后衍生装置 XB-C18    250mm x 4.6 mm 5um流动相：进样体积：C18，，4 x52µmmm  （乙腈：甲醇（50:50））：水=35:65   20ul     柱温：荧光检测器：  1 ml/min  35 °C    激发：365nm；发射：450nm

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